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Mature NGF/proNGF Combo (BEK-2212/2226), Human, Rapid ELISA - BEK-2223

Combo NGF/proNGF maduro (BEK-2212/2226), ensaio ELISA rápido humano.

DESCRIÇÃO

O Kit Biosensis Human Mature NGF/proNGF Combo Rapid enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) combina kits ELISA individuais, mas complementares, para as duas isoformas mais importantes de NGF: NGF maduro (BEK-2212) e proNGF completo (BEK-2226).

Ambos os kits são ELISAs sanduíche, úteis para a quantificação de NGF maduro e proNGF em menos de 4 horas em sobrenadantes de cultura celular, soro e plasma (citrato) somente se usados conforme indicado, com protocolo simplificado e sem perda de sensibilidade ou especificidade. Os pesquisadores usaram ambos os kits para medição de NGF/proNGF na urina humana, no entanto,  ainda não foi validado internamente o uso de urina em ambos os kits ELISA. Os usuários finais são fortemente aconselhados a realizar experimentos de validação essenciais para garantir a quantificação precisa de NGF/proNGF na urina humana. Consulte os protocolos de kit mais atuais para BEK-2212 (Mature BDNF RapidTM ELISA) e BEK-2226 (proNGF RapidTM ELISA), para obter instruções de uso específicas para cada aplicação, em particular amostras de sangue.

O kit Mature NGF ELISA consiste em um anticorpo de captura monoclonal anti-NGF de camundongo pré-revestido, um anticorpo anti-detecção de NGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). O kit proNGF ELISA consiste em um anticorpo de captura anti-proNGF pré-revestido, um anticorpo de detecção anti-proNGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). A adição de um substrato (3,3',5,5'-tetrametilbenzidina, TMB) produz um produto de reação colorido que é diretamente proporcional à concentração de NGF maduro ou proNGF presente em amostras e padrões de proteínas. Um controle positivo de NGF e proNGF (amostra de CQ) é fornecido para garantir o desempenho consistente do ensaio.

O kit Mature NGF ELISA emprega um padrão NGF humano recombinante de alta qualidade aprovado pela Organização Mundial da Saúde (OMS). O kit proNGF ELISA contém um padrão proNGF humano recombinante expresso em E.coli. Observe que este kit Mature NGF/proNGF Combo é projetado para medir as formas de proteína humana, embora devido à homologia de sequência, o kit Mature NGF ELISA detectará NGF maduro de camundongos e ratos. O kit proNGF ELISA não reage de forma cruzada com formas de proNGF em roedores.

Este kit Combo é capaz de distinguir e quantificar independentemente as isoformas NGF maduras e NGF de comprimento total. Dados de validação interna demonstram <0,1% de reatividade cruzada (determinada a 25 ng/mL, diluída em tampão de ensaio) da proteína proNGF humana no ELISA NGF maduro, demonstrando a quantificação preferencial de NGF maduro sobre proNGF humano completo. A ausência de reatividade cruzada de proNGF no kit de ELISA NGF maduro foi confirmada independentemente por Mossa AH et al (2020). Os anticorpos usados no kit de ELISA proNGF se ligam a epítopos dentro do pró-domínio da proteína e, portanto, reconhecem o proNGF e o peptídeo pró-domínio, mas não reagem de forma cruzada com NGF maduro!

Importante: A quantificação precisa de NGF no plasma de citrato humano requer a adição do bloqueador de anticorpos heterofílicos BL-005-500. A quantificação precisa do proNGF no soro humano requer a adição do bloqueador de anticorpos heterofílicos BL-003-1000. Ambos os bloqueadores de anticorpos heterofílicos são fornecidos no kit.

Este kit ELISA não foi testado para outras aplicações. Ele foi configurado apenas para uso em pesquisa e não deve ser usado para procedimentos diagnósticos ou clínicos.
 

Componentes do kit  kit ELISA contém placa de tiras pré-revestidas de 96 poços, padrões de proteína, amostra de CQ, reagentes de detecção, bloqueador de anticorpos heterofílicos, tampões de lavagem e amostra, tampão de substrato e protocolos detalhados.

INFORMAÇÃO

O fator de crescimento nervoso (NGF) é sintetizado como um precursor (proNGF) que pode ser liberado e ter funções fisiológicas para causar morte celular. Ele se liga ao receptor de neurotrofina p75 e sortilina e também pode ser importante para o desenvolvimento do sistema nervoso. O proNGF é sintetizado nos tecidos-alvo e na glia, transportado retrogradamente e pode ser liberado.

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