Luminex - Imunoensaios Multiplex

Tecnologia Luminex xMAP® 

A tecnologia de imunoensaio Luminex xMAP® permite a quantificação simultânea de até 100 proteinas no soro, plasma, sobrenadante de cultura de tecidos, ou lisado celular. Os analitos possíveis incluem citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento, receptores solúveis, hormônios, moléculas de sinalização / fosforiladas, etc.

O LEAC oferece serviço de dosagem para uma ampla gama de painéis totalmente validados de citocinas / quimiocinas. Com inclusão de controle de qualidade em todos os ensaios.

 

Humano  Cytokine/Chemokin (38-plex)		Camundongo  Cytokine/Chemokine  (32-plex)		Rato Cytokine/Chemokine  (27-plex)
GM-CSF	IP-10	GM-CSF	MIP-1a	GM-CSF	IL-1a
IFN-g	MCP-1	IFN-g	MIP-1b	IFN-g	LIX
IL-10	MIP-1a	IL-10	VEGF	IL-10	MIP-2
IL-12(p70)	MIP-1b	IL-12(p70)	IL-12(p40)	IL-12(p70)	RANTES
IL-13	VEGF	IL-13	IL-1a	IL-13	IL-17A
IL-1b	EGF	IL-1b	IL-3	IL-1b	Leptin
IL-2	FGF-2	IL-2	KC	IL-2	EGF
IL-4	FIt-3L	IL-4	LIF	IL-4
IL-5	Fractalkine	IL-5	LIX	IL-5
IL-6	GRO	IL-6	M-CSF	IL-6
IL-7	IFN-a2	IL-7	MIG	TNF-a
IL-8	IL-12(p40)	TNF-a	MIP-2	Eotaxin
TNF-a	IL-1a	Eotaxin	RANTES	G-CSF
Eotaxin	IL-3	G-CSF		IP-10
G-CSF	MCP-3	IL-15		MCP-1
IL-15	MDC	IL-17		MIP-1a
IL-17	sCD40L	IL-9		VEGF
IL-1ra	TGF-a	IP-10		Fractalkine
IL-9	TNF-b	MCP-1		GRO

Os quatro painéis a seguir fornecem exemplos de proteínas que podem ser analisados pela plataforma Luminex.
 

Human Th17  (25-plex)		Mouse Th17  (25-plex)		Human Metabolic Hormone (12-plex)	Human Akt/mTOR Signaling (11-plex)
GM-CSF	IL-28A	GM-CSF	IL-28B	Amylin (total)†	Akt
IFN-g	IL-31	IFN-g	IL-31	C-peptide	GSK3a
IL-10	IL-33	IL-10	IL-33	Ghrelin (active)‡	GSK3b
IL-12(p70)	MIP-3a	IL-12(p70)	MIP-3a	GIP (total)	IGF1R
IL-13	TNF-a	IL-13	TNF-a	GLP-1 (active)	IR
IL-1b	TNF-b	IL-1b	TNF-b	IL-6	IRS1
IL-2		IL-2		Insulin	mTOR
IL-4		IL-4		Leptin	p70 26 Kinase
IL-5		IL-5		MCP-1	PTEN
IL-6		IL-6		Pancreatic Polypeptide	RPS6
IL-9		IL-15		PYY (total)	TSC2
IL-15		IL-17A		TNF-a
IL-17A		IL-17E/IL-25
IL-17E/IL-25		IL-17F
IL-17F		IL-21
IL-21		IL-22
IL-22		IL-23
IL-23		IL-27
IL-27		IL-28A

 

Desenho do Ensaio e ​Preparação de Amostras

1. Disposição da Placa: Cada placa de 96 poços pode acomodar 39 amostras em duplicata, com espaço para controles de qualidade e curva padrão. Para aumentar o seu custo benefício, recomendamos que os clientes utilizem a capacidade total da placa de 96 poços com amostras de seu interesse. Para minimizar a variabilidade de leitura, os clientes são recomendados a executar todas as amostras juntas no mesmo ensaio, mesmo com a nossa fonte de dados demonstrando variação mínima de CV inter-placas e alta reprodutibilidade. Caso os clientes necessitem correr múltiplas placas, as amostras de QC e curva padrão serão incluídas em cada placa para assegurar a precisão intra e inter ensaios.

2. Corrida de ensaio em uniplicata: Um método para diminuir custo que pode ser utilizado, é correr amostras em uniplicatas. Ao contrário de um ELISA tradicional que produz apenas uma única leitura por poço, a tecnologia Luminex xMAP® incorpora princípios de análise de FACS, em que coletamos 50 eventos por analito e por poço. As MFIs geradas são a média dessas 50 leituras. Consequentemente, é normal encontrar CVs entre 3-4% nas duplicatas. Apesar de ser recomendado o ensaio de amostras em duplicatas, pelo motivo citado acima, executamos ensaios em qualquer formato de amostra solicitado.

Por favor qualquer dúvida sobre o ensaio ou desenho de placa, entre em contato.

 

Coleta de Amostras

1. Volume de amostra:

Uma das vantagens dos ensaios Multiplex Luminex é a quantidade mínima de amostra necessária. Precisamos de 300 microlitros para executar amostras não diluídas em duplicata. Solicitamos este volume, pois, as amostras são previamente microcentrifugadas (para retirada de impurezas) e só o sobrenadante é pipetado. Este procedimento é vital, para evitar interferência na ligação dos anticorpos nas beads magnéticas. No caso de volumes menores disponíveis, consulte-nos. 

2. Coleta de Amostras:

1. Para soro, colete o sangue em tubo seco tipo  Vacutainer®  sem anti-coagulante. Deixe o sangue coagular a temperatura ambiente por 30 minutos. Centrifugue entre 2000 a 3000 RPM por 15 minutos em centrífuga refrigerada de 4 ± 2ºC.
Transfira e armazene as amostras de soro em tubos tipo eppendorf de 1,5 mL.
Todas as amostras devem ser processadas e congeladas a -80 °C  dentro de 4 horas após a coleta.

2. Para plasma, colete o sangue total em tubos tipo Vacutainer® com EDTA e centrifugue imediatamente após a coleta. Centrifugue entre 2000 a 3000 RPM por 15 minutos em centrífuga refrigerada de 4 ± 2ºC. 
Transfira e armazene as amostras em tubos tipo eppendorf de 1,5 mL.
Todas as amostras devem ser processadas e congeladas a -80 °C  dentro de 4 horas após a coleta.

3. Para outros tipos de amostras consulte-nos. Realizamos dosagens em vários tipos de amostras como: Sobrenadante de cultura celular/tecido, tecidos lisados, urina, blood spots, fluído gengival, lavado nasal, lágrimas, liquor, lavado broncoalveolar, saliva, secreção vaginal, etc.


4. Armazenamento e Transporte: as amostras devem ser mantidas à temperatura de -80 ° C e transportadas em gelo seco usando precauções de segurança adequadas. De preferência, os ciclos de degelo devem ser evitados. 
 

Entrega dos Resultados

Os clientes receberão por e-mail os resultados dos ensaios com curvas padrão, as concentrações devidamente calculadas, em planilha excel, com avaliação técnica acurada das análises e parâmetros de controle de qualidade.

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